Will & Grace se passa na cidade de Nova York e se concentra na relação entre Will Truman, um advogado gay e sua melhor amiga Grace Adler, uma mulher judia que possui uma empresa de design de interiores. Os dois estão acompanhados de seus amigos Karen Walker, uma socialite alcoólatra, e Jack McFarland, um ator alegremente gay. A relações entre eles trás provações e confusões de namoro, casamento, divórcio e sexo casual. Bem como piadas da cultura gay e judaica.
Eric McCormack como Will Truman: O primeiro protagonista titular da série, Will é um homem gay que é um advogado corporativo de sucesso que estudou na Universidade de Columbia, que é onde ele conheceu Grace, como um calouro; Eles têm sido melhores amigos desde então. Ele é muito preciso e obsessivo quando se trata de certas tarefas, especialmente limpeza, vestir e decorar. No entanto, Will tem uma natureza muito paciente e compassivo para com aqueles que estão perto dele, apesar das falhas. Mesmo que Will seja gay, tenta não ser muito afetado. Ele, às vezes, evitou admitir sua orientação sexual para as pessoas. Vários personagens comentaram que sua relação com Grace é mais parecida com a de um casal que de dois amigos. Will é o personagem mais maduro e tolerante da dupla e serve como a consciência de Grace na maioria das vezes.
Debra Messing como Grace Adler: A segunda protagonista titular da série. Grace é uma decoradora de interiores hétero, com um gosto enorme por comida e homens. Ela tem sido a melhor amiga de Will desde a faculdade e companheira de quarto durante a maior parte da série. Ela é judia, mas não pratica sua religião com firmeza. Grace joga como um contrapeso neurótico para o caráter de Will cada vez mais. Tende a confiar pesadamente em Will como seu apoio moral e emocional, especialmente, após uma dissolução.
Sean Hayes como Jack McFarland: O primeiro amigo gay de Will. Jack é extravagantemente homossexual, confiante e livre de espírito. Ele troca várias vezes de namorados e muda de profissão muitas vezes, sendo muito inconstante quando se trata de ambos. Ele trabalhou como ator lutador, instrutor de atuação, dançarino de apoio para Jennifer Lopez e Janet Jackson, um associado de vendas na Banana Republic e loja de departamentos da Barney, um garçom, um enfermeiro, Vice-presidente Junior da Out TV e apresentador do seu próprio programa de TV, chamado Jack Talk. Jack é conhecido na série por seus pequenos shows intitulados de "Just Jack", "Jack 2000", "Jack 2001" e "Jack 2002", onde mostra suas habilidades de cantar, dançar e atuar. No início da série ele estabelece uma amizade forte com Karen. Passam muito tempo juntos e orquestram várias brincadeiras. Ao longo da série, Jack confia em Will e Karen para apoio financeiro. Seu ídolo é Cher.
Megan Mullally como Karen Walker: Karen "trabalha" como assistente de Grace, tornando "Grace Adler Designs" popular entre seus conhecidos da socialite. Ela é a esposa do rico Stanley Walker. Karen também é conhecida por casualmente sempre estar bêbada e tomando vários medicamentos não saudáveis. No entanto, ela é muito amiga de Jack, que é um grande amigo de Will. Mesmo que ela seja boba, às vezes, Karen tem mostrado ataques de inteligência: ter um conhecimento prático de negócios e economia do mercado imobiliário, uma compreensão moderada de computadores e um talento para design de interiores. Muitas vezes é vista criticando e zombando de pessoas mais pobres que ela e do que não consegue entender.
